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测定意义
复合体Ⅰ(EC1.6.5.3)又称 NADH-CoQ 还原酶或 NADH 脱氢酶,广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中,是线粒体内膜中最大的蛋白复合物。该酶催化一对电子从NADH 传递给 CoQ,同时可使O2还原生 O2-,是呼吸电子传递链上产生O2-的主要部位。测定该酶活性,不仅可以反映呼吸电子传递链(ETC)状态,而且可以反映活性氧(ROS)生成状态。
测定原理
复合体Ⅰ能够催化NADH脱氢生成NAD+,在340nm下测定 NADH 的氧化速率计算出该酶活性的大小。
试剂的组成和配制
试剂一:25mL×1 瓶,-20℃保存;
试剂二:5mL×1 瓶,-20℃保存;
试剂三:0.5 mL×1 瓶,-20℃保存;
试剂四:25mL×1 瓶,-20℃保存;
试剂五:1 mL×1 支,-20℃保存;
试剂六:粉剂×1 支,-20℃保存,用时加入 2mL 蒸馏水,现配现用;
工作液的配制:临用前将试剂五转移到试剂四中混合溶解;现配现用;